GenixTalk

• LIC™チューブは4℃に保存する。
  ※開封後は一ヶ月以内に使用する。

• RNA/LIC™複合体は、実験毎に用時調製する。調製した複合体は当日中に使用し、保存しない。
• 調製するRNA/LIC™複合体の最高濃度は50 µg/mL（RNA濃度）とし、調製容量は最低100 µLとする。
• RNAとLIC™の混合比は、1:16（重量）とする。
• RNA溶液とLIC™溶液は、1:1（容量）で混合する（等容量）。

• LIC™溶液に、等量のRNA溶液を少量ずつゆっくり滴下する。5秒間程度、穏やかに混合する。
• 調製したRNA/LIC™複合体は、 RNase-free生理食塩水あるいは無血清培地でさらに希釈して用いる。

• 細胞を培養プレートに播き、一晩培養する。この時、翌日に50〜60%のコンフルーエンスになるような細胞密度が望ましい。
• 翌日培地交換を行った後、調製したRNA/LIC™複合体を培地中に添加する。この時添加するRNA/LIC™複合体は、培地の1/9容量とする。

• すべての操作は無菌的に行う。
• 本LIC™調製法はin vitro実験用である。in vivo実験用には、使用しない。

以下に1 µM RNA/LIC™複合体を100 µL調製する例を示す。
使用するsiRNAは21塩基対の二本鎖RNA（分子量：　13,400）とする。

• 2 µM siRNA溶液（Ａ液）と、LIC™溶液（Ｂ液）を別々のチューブに各々50 µL用意する。希釈液は、 RNase-free生理食塩水または無血清培地を用いる。

  A液： 2 µM siRNA溶液　（50 µL）
  20 µM siRNA溶液	5 µL （1.34 µg RNA）
  希釈液	45 µL
  B液： LIC™溶液　（50 µL）
  LIC™原液　（1 mg/mL）	21.4 µL （ µg lipid）
  希釈液	28.6 µL

• B液に、等量のA液を少量づつゆっくり滴下する。5秒程度、穏やかに混合する。
• 調製したRNA/LIC™複合体は、 RNase-free生理食塩水あるいは無血清培地でさらに希釈した後、培地中に添加する。この時添加するRNA/LIC™複合体は、培地の1/9容量とする。